Identificación de genotipos de cepas aisladas de Plasmodium falciparum mediante la reacción en cadena de la polimerasa y sus posibles usos en estudios epidemiológicos / Genotyping of Plasmodium falciparum isolates by the polymerase chain reaction and potential uses in epidemiological studies

La epidemiología del paludismo es el resultado de la interacción que tienen entre sí y con el medio circundante tres acervos genéticos: el del parásito, el del ser humano y el del mosquito vector. Actualmente se están elaborando métodos para caracterizar la genética de las poblaciones humanas en riesgo y de los posibles vectores, y a fin de llegar a conocer más a fondo la epidemiología, mecanismos patógenos y biología de este parásito también sería enormemente útil caracterizar las poblaciones naturales de Plasmodium y su distribución en huéspedes humanos y en insectos de zonas de estudio determinadas, especialmente si este enfoque se combina con estudios simultáneos en seres humanos y con los vectores. En este trabajo se describe un ensayo basado en la reacción en cadena de la polimerasa (RCP), que proporciona un método sensible, práctico y reproducible para caracterizar distintas poblaciones de parásitos de una misma especie. Con el fin de ilustrar la idoneidad de este tipo de ensayo, se escogieron y amplificaron con la RCP cuatro dominios polimórficos de los genes de tres proteínas de P. falciparum (los bloques 2 y 4 de la proteína de superficie del merozoito tipo 1 (PSM1), la tipo 2 (PSM2) y la proteína rica en glutamato (PRGLU) y una región casi enteramente conservada (el bloque 17 de la PSM1). Sirvieron de molde para amplificar con la RCP los ADN derivados de 15 líneas de P. falciparum cultivadas in vitro (siete de las cuales fueron clonadas) y de muestras de sangre de pacientes infectados procedentes de Tailandia. Los productos de la amplificación se analizaron por electroforesis en gel para detectar polimorfismos de longitud. Se detectaron siete variantes alélicas de la PRGLU, cinco del bloque 2 de la PSM1, tres del bloque 4 de la PSM1 y nueve de la PSM2. Este alto grado de polimorfismo se puede usar para caracterizar la composición genética de cualquier población de parásitos en un momento dado. En este trabajo se examina la aplicabilidad de esta forma de identificar genotipos en el campo de la epidemiología y se recomienda la adopción de patrones internacionales para su empleo, de tal modo que se puedan comparar los datos obtenidos en distintos lugares y momentos (AU)

Identificación de genotipos de cepas aisladas de Plasmodium falciparum mediante la reacción en cadena de la polimerasa y sus posibles usos en estudios epidemiológicos / Genotyping of Plasmodium falciparum isolates by the polymerase chain reaction and potential uses in epidemiological studies

La epidemiología del paludismo es el resultado de la interacción que tienen entre sí y con el medio circundante tres acervos genéticos: el del parásito, el del ser humano y el del mosquito vector. Actualmente se están elaborando métodos para caracterizar la genética de las poblaciones humanas en riesgo y de los posibles vectores, y a fin de llegar a conocer más a fondo la epidemiología, mecanismos patógenos y biología de este parásito también sería enormemente útil caracterizar las poblaciones naturales de Plasmodium y su distribución en huéspedes humanos y en insectos de zonas de estudio determinadas, especialmente si este enfoque se combina con estudios simultáneos en seres humanos y con los vectores. En este trabajo se describe un ensayo basado en la reacción en cadena de la polimerasa (RCP), que proporciona un método sensible, práctico y reproducible para caracterizar distintas poblaciones de parásitos de una misma especie. Con el fin de ilustrar la idoneidad de este tipo de ensayo, se escogieron y amplificaron con la RCP cuatro dominios polimórficos de los genes de tres proteínas de P. falciparum (los bloques 2 y 4 de la proteína de superficie del merozoito tipo 1 (PSM1), la tipo 2 (PSM2) y la proteína rica en glutamato (PRGLU) y una región casi enteramente conservada (el bloque 17 de la PSM1). Sirvieron de molde para amplificar con la RCP los ADN derivados de 15 líneas de P. falciparum cultivadas in vitro (siete de las cuales fueron clonadas) y de muestras de sangre de pacientes infectados procedentes de Tailandia. Los productos de la amplificación se analizaron por electroforesis en gel para detectar polimorfismos de longitud. Se detectaron siete variantes alélicas de la PRGLU, cinco del bloque 2 de la PSM1, tres del bloque 4 de la PSM1 y nueve de la PSM2. Este alto grado de polimorfismo se puede usar para caracterizar la composición genética de cualquier población de parásitos en un momento dado. En este trabajo se examina la aplicabilidad de esta forma de identificar genotipos en el campo de la epidemiología y se recomienda la adopción de patrones internacionales para su empleo, de tal modo que se puedan comparar los datos obtenidos en distintos lugares y momentos (AU)

Se publica también en inglés en el Bull. WHO. Vol. 73(1), 1995

Genotyping of Plasmodium falciparum isolates by the polymerase chain reaction and potential uses in epidemiological studies.

The epidemiology of malaria results from the interactions of three gene pools--parasite, human, and mosquito vector--with one another and with their environment. Methods are being developed for characterizing the genetics of human populations at risk and of potential vectors. The characterization of natural populations of Plasmodium and knowledge of their distribution within the human and insect hosts in any given area under study would also greatly enhance understanding of the epidemiology, pathology and biology of this parasite, particularly when combined with simultaneous human and vector studies. This paper describes a polymerase chain reaction (PCR)-based assay which provides a sensitive, reproducible and practical method by which parasite populations within species can be characterized. In order to illustrate the suitability of the PCR assay, four polymorphic domains on the genes of three P. falciparum proteins (MSP1 blocks 2 and 4, MSP2, and GLURP) and one largely conserved region (MSP1 block 17) were chosen for amplification by PCR. DNA derived from 15 in-vitro cultured lines of P. falciparum (7 of which were cloned) and from blood samples obtained from infected patients in Thailand were used as templates for PCR amplification. The amplification products were analysed by gel electrophoresis for length polymorphisms. Seven allelic variants of GLURP, five of MSP1 block 2, three of MSP1 block 4, and nine of MSP2 were detected. This high degree of polymorphism can be used to characterize the genetic composition of any parasite population, at a given time. The paper discusses the applicability of this type of genotyping to epidemiology and urges the adoption of international standards for its use so that data from different areas and different times can be compared.